1.剖析實(shí)驗(yàn)使用的類型
一般抗體闡明書(shū)都列出該抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種剖析類型，假如抗體闡明書(shū)沒(méi)有提及的使用類型，并不意味著該抗體不適用于此種剖析使用類型，而僅是闡明尚未經(jīng)過(guò)此種剖析實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，假如抗體不適用某些剖析實(shí)驗(yàn)，則會(huì)在抗體闡明書(shū)上標(biāo)注出來(lái)不適于某剖析實(shí)驗(yàn)。
2.樣本的物種
應(yīng)挑選物種相同或有穿插反響的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有穿插反響，因其氨基酸序列同源性較高，假如樣本的種類未列入抗體闡明書(shū)上的穿插反響種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而僅僅表明該物種尚未用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò)，應(yīng)經(jīng)過(guò)序列比對(duì)的辦法來(lái)猜測(cè)穿插反響，可使用Expasy 和 NCBI BLAST來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。
3.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)
了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于挑選*適宜的抗體，至少兩方面因素需求考慮:
1）.待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來(lái)，其中的免疫原包含：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，抗體闡明書(shū)一般都有免疫原的描繪，假如打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須挑選用含此片段域的免疫原制備出的抗體。
2）.樣本的提取或處理進(jìn)程：某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特殊處理，例如：許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識(shí)別天然折疊狀態(tài)的蛋白。
4.一抗宿主物種的挑選
一般說(shuō)來(lái)，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種挑選較為重要，關(guān)于免疫組化而言，盡可能挑選與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白發(fā)生穿插反響
5.二抗的挑選
二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)歷，主張檢查二抗闡明書(shū)保證該抗體適用于你的檢測(cè)使用， 二抗一般連接熒光素FITC或發(fā)光團(tuán)。
6.兩層染色抗體的挑選
用未偶聯(lián)一抗進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)物或安排切片的兩層免疫染色要求一抗來(lái)歷于不同物種而且二抗別離識(shí)別其中，二抗闡明書(shū)應(yīng)描繪其與其它物種來(lái)歷的免疫球蛋有否有穿插吸附。
7.熒光和化學(xué)發(fā)光符號(hào)
連接于二抗的符號(hào)物是為了檢測(cè)抗體的結(jié)合，挑選符號(hào)物依賴于幾個(gè)參數(shù)：
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